馬の排卵同期化と発情誘起

馬の繁殖シリーズ第1章は今回でひとまず完結
過去の投稿は
→①馬の性周期におけるホルモン支配
→②馬の交配適期・授精適期とその予測
→③馬の採精と精液処理
→④馬の精液注入（人工授精 artificial insemination)
→⑤馬の凍結精液

2017年フランスからの馬凍結精液の輸入解禁、そして2018年日本で25年(?)ぶりとなる馬受精卵移植の成功、と日本の馬生産は今ターニングポイントに差し掛かっている。

日本は馬精液の凍結法の確立や、受精卵移植による馬の生産を世界で初めて成功させた。しかしその後、モータリゼーション到来に伴い農用馬が減少。自然交配しか認められていないサラブレッドの生産に偏っていった結果、馬の生殖補助医療技術は失われてしまった。

排卵同期化法も同様で、近年の日本での臨床報告は軽種馬のhCGによる排卵コントロール（宮越ら 2014）、重種馬におけるブセレリンの排卵効果（三木ら 2017）、重種馬のPGF2αによる性周期同期化（三宅ら 1976）、重種馬のE2,CIDR,PG,によるプログラム交配（安田ら  2008）程度しか見当たらない。

海外では1981年にLoyらが同期化法のベースを確立させて以降、凍結精液の定時人工授精法や移植レシピエントの排卵同期化処置として様々に発展し、普及している。

国内でも報告は見つけられなかったが、海外に倣ってプロジェステロンの経口薬（日本で動物用薬は市販されていない）を使った発情誘起・発情同期化がけっこう行われているようだ。しかし、どこまでの精度で排卵同期化できるのかはわからない。

そこで必要なのが2019年家畜診療掲載の家畜診療等技術・東北地区発表会抄録「CIDR,PGF2aおよびhCGを併用した馬の排卵同期化（庄野ら 2018）」のような臨床報告となる。

CIDR（シダー1900）を9 or 10日間膣内留置し、抜去時にPGF2a（プロナルゴン1ml）を筋注。その4日後にhCG（ゴナトロピン3000IU）を静注するという方法で、定時排卵率が77.8％という成績を得ている。
この場合の定時排卵率というのは、hCG投与時から96時間以内に黄体が確認された割合ということで、排卵48時間前から排卵24時間後とされる授精適期や、レシピエントの排卵日はドナーの排卵日の前日から2日後まで許容されるという受精卵移植の排卵同期化を意識したモノになっている。
やや精度が低い感は否めないが、さらにE2を併用するなどして今後改良されていけばと思う。

馬にCIDRを入れるときは青い紐を外した方が膣炎防止になりそう

紐がなくても膣鏡があれば抜ける

さらにこの方法は無発情馬や繁殖移行期にも使えそうだ。

海外も含めたこれまでの報告によると、鈍性発情や黄体遺残であればPGだけでも治療効果が期待できるし、CIDRもしくはCIDR+E2を使うことで卵巣静止でも発情誘起が期待できる。

この方法であれば牛で一般的に使用されている薬品しか使用しないので、馬獣医がいない地域の馬にも処置することができるし、さらに改良されればもう直検やエコー検査を行わずにプログラム交配ができるようになるかもしれない。

ちなみに牛の獣医からはよく「馬のPG（ジノプロスト）はなんで牛の5分の1の量でいいの？」とよく聞かれるが、実はこれ簡単な話ではない。

まずPGは普通、"全身循環するホルモン"とは異なり、子宮で産生されたものが卵巣静脈から卵巣動脈に直接移行する「対交流機構」によって卵巣に到達する。しかし、ウマとウサギは卵巣静脈と卵巣動脈が物理的に分離しておりこの機構が存在しない[1]。

その一方でウマはPG自体がPGの産生を増幅させるという自己分泌増幅機構を持つことが2016年に解明された[2]。

これによって子宮で産生されたPGが直接卵巣に届かなくても黄体退行が起こるし、注射量が少なくても黄体退行が起こる。PGを打つと馬が全身から発汗し疝痛のような様子を示すのもおそらくここからきていると思われる。

[1]シバヤギにおける子宮由来ＰＧＦ２αの卵巣への伝達機構とくにｃｏｕｎｔｅｒ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍに関する研究

[2]ウマの子宮から分泌される黄体退行因子 PGF2α は自己分泌増幅機構を持つ

～動物種間でホルモン製剤感受性が異なる謎を解明～

早池峰山ドライブ

2018年5月

霊峰として名高い早池峰山(1914m)だが、意外なことに車で小田越登山口1240mまで行くことができる。

というのも、内陸の紫波町から沿岸の宮古市まで早池峰山と薬師岳の間を県道25号が走る。

今回は大迫ワインシャトーからスタートして県道43号盛岡大迫東和線を北上し、道の駅はやちねから県道25号紫波江繋線に入る。

名物のワイン（右）と鹿踊り（丘の上）のモニュメント 

ちょっと味気ない「後味さっぱり」が売りのソフトクリーム

 "入る"などとあっさり書いたが、実はこのドライブそう簡単なものではない。

道の険しさもさることながら11月から5月にかけて冬季通行止めなうえに、6月から8月の土日祝日は自然保護のためのマイカー規制がかかっていて、早池峰と薬師岳の間をドライブするチャンスは1年のうちごく限られた期間しかない。

しかも、道の駅はやちねから分岐した先の盛岡に向かう長野峠はもう長いこと崩落通行止め、仮に開通しても紫波に向かう折壁峠とともに冬季通行止めという秘境だ。

登山シーズンには多くの人が訪れるようだが、登山客はマイカー規制時は麓からバスで、規制解除時は登山口から少し離れたキャンプ場に駐車していく。

はやちね左折の看板

奥にダムが見える

最初は国道との重複区間や旧道・新道が入り混じっていてわちゃわちゃしており、あまり楽しいドライブではないが、ダムが近づくにつれて気持ち良く走れる。

ダム湖からくっきり見える山に向かって「あそこまで行くぜ」と気合を入れるも案内板を見ると、ぴょこぴょことふたつの頂がある山は鶏頭山という別の山だった。ここから早池峰山は見えないようだ。

ちなみに、早池峰山は遠くからは見えるが近づいていくと見えなくなる不思議な山といわれるように、遠野盆地側から見た場合も手前に標高1645mの薬師岳が居座っている。沿岸や内陸など離れた地域で信仰が強いのを奇妙に思っていたが、その辺と関係があるのだろうと思う。

道の駅はやちねの向かいの駐車場

2013.4 　遠野側

ずっと奥の白い山が早池峰山だが薬師岳に隠されて白い部分がへの字に見える

最後の集落を抜けると本格的な山道に入り道幅は狭くなるが、路面はまずまず綺麗で対向車さえ気を付ければ快適に走れる。

早池峰山のワイルドな山肌を左に、滝になっているいくつかの沢を右に見ながら曲がりくねった道を進んでいく。

河原の坊の山小屋を過ぎるといきなり遠野市のマークの河童が表れる。

どういうわけか遠野の早池峰神社（元持福院妙泉寺）から早池峰山山頂まで細長く遠野市の土地になっている。

なので、小田越登山口を過ぎると今度はすぐ宮古市（旧川井村）になる。

岳という集落を最後に山道に入る

清廉の滝

河原の坊駐車場

名立たるSUVとハイエースに囲まれてアウェーなmito

小田越登山口手前で花巻市から遠野市に

山頂に一番近い小田越登山口には駐車場がなく駐車禁止なのだが、山の管理人さんに数分停める許可をいただく。聞けば管理人さん、若い時はツインスパークでブイブイ言わしていたらしい。エコじゃない山男だ。
ここからは早池峰山の南面と薬師岳の北面が見える。
1合目から早くも高山植物帯になるというだけあって、県道沿いでも十分登山した気分に浸れてしまう。
山頂まで2時間半ほどで登れるとのことだが、見るからにごつごつとした山肌は初心者には少し厳しそう。でもいつか山頂までは行かずに高山植物帯まで行って戻ってくるだけの登山ならやりたい。
薬師岳は山頂がすぐ近くに見えるのだが、聞けば薬師岳は北面で雪も多いし勾配が急なので上級者向きとのことだった。こちらも30分も歩けば高山植物がみられるという。

北を向くと早池峰山

南を向くと薬師岳

このまま宮古側に抜ければ国内で最後に電気が通ったという江繋か途中の分岐で遠野の荒川牧野に行くことになるが、今回は来た道を戻る。岳という集落で「お山カフェ　アスチルベ」へ、パスタなどがおいしいらしいのだが、テイクアウトで帰りたかったので我ながらひどいチョイスだとは思うが太巻きとケーキを。

岳のカフェ　アスチルベ

偶然にも開業したばかりとのこと

魔女とな

品薄だったためケーキと太巻きの組み合わせテイクアウト

早池峰ダム東から帰る

馬の凍結精液

競馬先進国となった日本だが、馬術については欧米に追い付いていない。

2018年のアジア大会・世界選手権パラにおける馬場・障害・総合での日本勢の活躍は、東京オリンピック・パラリンピックにむけて期待が膨らむものだった。しかし、まだまだ馬術が日本に浸透しているとは言えない。

何より競技馬の生産が足りない。

生産頭数も足りなければ生産技術も足りないのだが、今後変わっていくはずだ。

平成29年にフランスからの凍結精液の輸入が解禁された。牛の品種改良を見ればわかるように凍結精液による人工授精（と受精卵移植）が改良の効率化に与える影響は大きい。

現在は日本でごくごく一部（2か所？）でしか作られていない凍結精液だが、今後普及していくだろうと思う。

人工授精の精液注入方法については前回の投稿を参照。

馬精液のストロー凍結方法は日本家畜人工授精師協会の本によると

グルコース、ラクトース、ラフィノース、クエン酸Na、第2リン酸Na、酒石酸カリNaの水溶液に

卵黄を添加した液の上澄みにペニシリンGカリウムとストレプトマイシンを添加した希釈液（HF-20-A液）を精液に加えた後、1500rpmで遠沈させ上澄みを除去。

沈殿精子に再び希釈液を加え５℃に冷却したら、HF-20-A液にグリセリン10%を添加した液（HF-20-B液）等量を点滴などで徐々に添加しストロー(牛用)に封入する。

ストローは液体窒素液面上3～5cmの位置において凍結させる。

等々書かれているが、今後改良されていくと思うので詳細は割愛。

凍結精液ストローの融解法も同じ本に

「35～40℃の水にストローを投入して速やかに融解する。１授精当たり6～10ストロー分の精液を融解し、これに30℃に温めたHF-20-A液を加えて20ml前後にして授精に供する。」

と載っているが、おそらく今後は牛用のモ5号やYTガンもしくはIMVやminitubeで扱っているような深部注入カテーテルに融解したストローをそのまま入れる方式にかわっていくと思う。ちなみに融解後の希釈液は岩手県ではスーパーマーケットの牛乳コーナーに普通に売られている小岩井の無脂肪牛乳でも全然大丈夫。他県では手に入れにくいらしいが。

凍結精液の受胎率向上には、凍結手技や授精手技の向上に加え、そもそも個体差が大きいとされる精液の耐凍能による種雄馬の選別が必要と考えられ、そう簡単に普及させられる代物ではないのだが、馬関係者の一層の奮起によって競技馬生産を欧米並みに引き上げるチャンスを今掴むべきだろう。

参考文献

馬人工授精マニュアル　日本家畜人工授精師協会

Allen WR, Antczak DF : Reproduction and modern breeding technologies in the mare, The Genetics of the Horse, Bowling AT , Ruvinsky A,307-342, CABI, Cambridge(2000)

R283仙人峠のループ線と釜石鉱山鉄道

2018年4月
遠野市の地図を見ていて気になることがある。

産直ともちゃんの案内看板

中心よりも少し右上の仙人峠にある「くるりんちょ」は何？

雪解けを待って行ってみることにした。

ちなみにこの地図は古くて釜石自動車道仙人峠道路が描かれていない。

現在はJRの南側を平倉駅のあたりから道の駅釜石仙人峠までを仙人峠道路がほぼ最短距離で結んでいる。

今回走る仙人峠はこのバイパス道路ができたためにほぼ使われなくなった峠道で、mitoのドライブコースには最適だろう。

上郷駅入り口

仙人峠を含むR283は沿岸のR45と内陸のR4を繋ぐ道路だが今回は遠野市の上郷駅近くのローソンから出発することにした。通学に数人が使っているだけではなかろうかという田舎の駅だが、バイパス沿いのローソンが潰れてこっちのローソンが上郷町唯一のコンビニとなっている。出発して数十秒で立派な田舎道になるがこれは想定の範囲内。

あと24kmの看板。

途中まで1km刻みでなんだか癖になるタッチで名物（？）が描かれた看板がある

ワイルドな岩肌

滝で有名な鍾乳洞・滝観洞の近くを走っている

 仙人トンネル遠野側

今でこそバイパスができて旧道になったとはいえ、仙人トンネルは、内陸ー沿岸の物流に革命的な変化をもたらしたらしい。また、あまり知られていないが東日本大震災の時にも、大型の橋梁やトンネルが6割を占める新仙人峠道路が点検に時間がかかり通行止めとなっている間、この道が沿岸の命綱となっていたらしい。

しかし、遠野物語でこのあたりに仙人が出るからという説や、千人の鉱夫が生き埋めになったからという説がある名前の由来、どちらにしても気分のいいものではない。 

トンネル内真っ暗

仙人トンネル釜石側。雪がまだある

遠野側は道がきれいで広いし、勾配やカーブも気にならない程度しかなく快適というか、むしろつまらないくらい。がしかし、安心してほしい。出口は見えるがなかなかたどり着かない恐怖のトンネルを抜けた先のパーキングゾーンに車を止めてこれから己が進む道を眺めれば退屈の2文字は吹き飛ぶ。

これからこの坂を下る

 急勾配あと５ｋｍの看板

予想通り交通量は少ないが廃道然とした様子は見受けられない。バイパス道を通っても10分ほどしか短縮されないと見えて日常的に使っている人もいるようだ。

しかしこの急勾配と捩じれながら曲がりくねるカーブの連続は非日常。mitoのブレンボ製アルミモノブロック対向４ポッドキャリパーブレーキを下まで踏み込みながらシフトダウンするのは購入以来初ではなかろうか。登りならオーバーブーストを限界まで使うことになると思う。
とかなんとか考えていると谷を越える橋を通過。そこからの下り270度ターンをしたところでついに目的のくるりんちょの全貌が見えた。

 ループ発見

来てみればなんてことはない。ジャンクションなどで見られる回転しながら高度を変えるあれだ。しかし向かいの尾根に橋を架けることで急勾配をなくしつつ安全なルートを通るこの知恵と大胆さに感服。タイムリーについ先日ラジオで聞いた話だが、最新技術を駆使して自然の地形や気候に逆らって作った道路よりも、長い年月をかけて蓄積された経験から危険な場所を避けるように作られた道路のほうが工事の規模の大小にかかわらず自然災害に強いことが多いらしい。

さらに進むと鉄の町釜石のかつての心臓部である鉱山跡を通り、街中へ。途中バイパス道である仙人峠道路の高い高い橋脚を脇を通ったのちこの道と合流する。合流地点には甲子柿で有名な道の駅仙人峠があるが、甲子柿はシーズンにいっても品薄でなかなか手に入らない。しかたがないので醤油ソフトクリームを食べる。

鉱山跡

仙人峠道路と立体交差した後合流する

JR釜石線と並行して海へ向かう2車線+1車線の道

橋の上に線路跡を発見

そのままR45に向けて走っていくと3車線（2+1)の橋の真ん中に線路跡を発見。鉱山鉄道でも昔あったのだろうなと思ったらやはりそうらしい。

いや、そうらしいどころではない。つねぴょんの撮り鉄人生さんのホームページによるとこの釜石鉱山鉄道は横浜・神戸に次いで明治13年に日本で三番目に開業したという名のある鉄道ということだ。
しかもこのホームページには操業していた昭和60年当時の写真が多数掲載されている。
ナロー軌道の新日鉄釜石製鉄所のページの1枚目2枚目の写真に至っては下の写真と同じ場所を写しているではなかろうか。見比べてみてほしい。

戦争や高度経済成長、鉱山の閉鎖、東日本大震災による津波被害を乗り越えてきた釜石の鉄鋼業は今も町のシンボルになっている。新日鉄釜石ラグビー部も町のシンボルのひとつで、町は今2019年に開かれるラグビーワールドカップの準備で活気づいている。スタジアムも8月に完成した。

左：釜石駅　右：新日鉄

釜石イオンの駐車場に到着

ちなみに遠野の地図にはもう一つループ線があるが、こちらは非舗装極細幅のジムニー道と思われとても行く気にはなれない。

馬の精液注入（人工授精 artificial insemination)

これは直検

授精適期の診断と精液の処理が出来たらいよいよ精液の注入を行う。

必要なものは精液と直検手袋、注射シリンジ、プラスチックチューブ（下の写真はカナマイジェットのものを流用）、それに無菌で精子に支障のない潤滑ゲル（KYゼリーなど）。

陰部を洗浄消毒しきれいに拭く。人工授精のメリットのひとつが「生殖器の感染症を移さない」なのでここをしっかりやらなければ意味がない。合羽や手に付着した病原体を次に授精する雌馬に移すくらいなら、1回ずつ銭湯に入って着替えてくるほうがまだ有意義だ。鼻肺炎・パラチフスは本当に恐ろしい。

シリンジに吸った精液は日光に当たるとダメージを受けるのでできるだけ遮光して持つ。温度管理にも注意する。

カナマイジェット（廃盤）のチューブは硬さ太さがちょうど良い

AI用に誂えたかのような使い心地だ

受胎増進器やシース管を使うこともできる

潤滑剤を塗り膣内に手を挿入する。奥で子宮外口に触ることができるので、指先の操作でチューブを子宮内に進める。牛と違って馬の子宮頚管のひだは縦方向についているので弁のようなひだの牛の人工授精に比べると驚くほど簡単。この時、硬すぎず柔らかすぎずのチューブであれば子宮頚管よりも奥の排卵側の子宮に入れることができる。

このような盲目的方法の他に、膣鏡と子宮頚部用鉗子、シース管を使って子宮外口を目視下で注入する方法や内視鏡を使い卵管口の乳口嘴（ピンクのポッチがある）を目視しながら深部注入する方法もある。

しかし「盲目的」という名前のイメージとは裏腹にこの膣内に手を挿入する方法は実にたくさんの情報を手を介して感じることができ、最も効率的な方法だと思う。

子宮内視鏡

矢印：卵管口の乳口嘴

ただし、時間や精液に制約がある場合、人工授精成功のカギは手技よりも排卵タイミングにいかに合わせられるかなのでこちらの診断の研鑽が必要である。

卵胞の大きさが30mmくらいから50mmくらいで排卵するといわれるが、卵胞の大きさだけから排卵時期を推定することはできない。

子宮の浮腫像や卵胞の形の変化にも注意し、総合的に判断する必要がある。

車軸もしくはオレンジスライスに見える子宮の浮腫

排卵前の卵胞はまんまるからだんだん角ばってくる

（排卵窩に向かって卵胞が円錐状に伸びる）

参考
DVD馬の人生授精技術　日本馬事協会2012

ビショーネ

買っちゃった。かわいい。

特に舌が。

でもエンブレムの口から出ている赤いのは舌でも炎でもなく人らしい。

飲み込むところなのか吐き出すところなのかは諸説ある。

ミラノのヴィスコンティ家の紋章に由来する。

F1もシャルル・ルクレールがアゼルバイジャンで6位入賞するなどアルファロメオ・ザウバー活躍中！

馬の採精と精液処理

繁殖シーズン前の復習に始めたこのシリーズだったが、気づけばほとんどもうシーズンは終わってしまった。来年のための予習としたい。

馬の採精は雌馬もしくは擬牝台に種雄馬が飛び乗ったところで、陰茎を人工膣に誘導することで行われる。

偽牝台や人工膣にはいろいろな種類があるが、偽牝台は馬の輪郭を模造する必要はなく、馬と人の安全が第一に作られたシンプルなものが多い。人工膣は筒形のゴムを太いアルミ製の外筒の中を通して両端を外筒の外側に折り返すことで、ゴムと外筒の間に温水を入れて膣内の温度と圧力を再現している。重要なのは中の水を41～43℃に調節することだ。

人工膣の外筒

中のゴム 

装着後

細いほうに精液が入る袋を付ける

採取した精液は室温（20℃ほど）でガーゼで濾してゲル状の膠様物を取り除く。
流動性・色・精子濃度・前進運動率でこれを評価する。活力測定には顕微鏡に熱テーブルを付けて37℃に設定する必要がある。

1回にとれる精液の量は5mlだったり150mlだったり個体差や日差でいろいろだが、これを希釈することで一回の射精で複数の繁殖牝馬に種付けできるようになる。
希釈液は日本では牛用のものを流用したり、市販の無脂肪牛乳をつかったりいろいろだが、いずれにせよ同じ温度にすることとpHを安定させること、精子に必要なエネルギーを保つ物質が含まれていることが大切のようだ。

一応希釈の際に使う式があるのだが、要するに総精子数に前進運動率をかけた有効精子数が設定する数になるように希釈するということ。
有効精子注入数は新鮮精液なら最低で3億、できれば6億ほど欲しいといわれている。凍結精液では有効精子が8億かつ、解凍後の前進運動精子が35％以上が最低でも必要といわれる。

理想的な希釈率は最終的な希釈により1mlあたりの有効精子（前進運動精子）が2500万と本にある。なのでこれを固定とすれば、例えば取れた精液が45ml、密度1.45億、前進運動60%であった場合には、総精子数(6.525)×前進運動(0.6)を最適密度(0.025)で割って156.6mlとなる。
有効精子注入数を1頭につき6億と設定すると、2500万/mlなので注入量は24ml。
よって6頭の牝馬に人工授精できる。

希釈率や有効精子注入数は変えることができる。深部注入などによって5000万ほどの有効精子数でも安定して妊娠させることができるlow-dose insemination法が欧米では研究されている。

精液の注入法については次回。

参考文献
馬の人工授精の理論と実践　E・クルーク、H・ジーメ
日本馬事協会出版　第5版？